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時(shí)間相關(guān)單光子計(jì)數(shù)(Time Corelated Single Photon Counting, TCSPC) 以單光子的靈敏度、高信噪比的特點(diǎn)成為熒光壽命測(cè)試中一種非常重要的時(shí)域測(cè)試技術(shù)。TCSPC的電子部分可以看作快速秒表，這個(gè)秒表被來(lái)自光源的START信號(hào)觸發(fā)后開(kāi)始計(jì)時(shí)，而被檢測(cè)器接收到的STOP信號(hào)脈沖終止計(jì)時(shí)。START和STOP之間的時(shí)間差，即為樣品受激后發(fā)出的第一個(gè)光子與激發(fā)光之間的時(shí)間差。最終顯示在柱狀圖上的計(jì)數(shù)相對(duì)時(shí)間的函數(shù)實(shí)際上就代表了熒光強(qiáng)度相對(duì)時(shí)間變化的曲線(xiàn)，即熒光壽命衰減曲線(xiàn)。
TCSPC測(cè)試原理圖
卓立漢光推出全新?代?精度時(shí)間相關(guān)單光?計(jì)數(shù)TCSPC Plus數(shù)采系統(tǒng)DCS900PC-G2，實(shí)現(xiàn)低?2ps的時(shí)間分辨率，同時(shí)死時(shí)間降低?2ns，計(jì)時(shí)抖動(dòng)＜10ps，可?持?達(dá)500Mcps的瞬時(shí)飽和計(jì)數(shù)率。該數(shù)采卡使用在OmniFluo990穩(wěn)態(tài)瞬態(tài)熒光光譜儀以及OmniFluo-FLIM 熒光壽命成像顯微鏡上，與皮秒脈沖激光器聯(lián)用時(shí)，壽命測(cè)試下限可達(dá)100ps，可為分子內(nèi)部快速動(dòng)力學(xué)過(guò)程的探索，提供有利的研究工具。
實(shí)測(cè)案例
TCSPC Plus在低至100ps的短熒光壽命測(cè)試中表現(xiàn)出色，甚至對(duì)于熒光壽命略低于100ps的樣品，我們同樣得到了準(zhǔn)確性高，可與文獻(xiàn)媲美的測(cè)試效果。以下為相關(guān)測(cè)試案例。
樣品為赤蘚紅B (Erythrosin B)水溶液，激發(fā)光源采用超連續(xù)白光激光器，頻率設(shè)置為10M。激發(fā)波長(zhǎng)為500nm。發(fā)射側(cè)單色器帶寬為0.8nm，檢測(cè)器為R928P光電倍增管，探測(cè)波長(zhǎng)為555nm。TCSPC時(shí)間分辨率為2ps，延時(shí)44ns。
水中赤蘚紅B熒光壽命測(cè)試
經(jīng)過(guò)Omni-Win軟件擬合可以得到水中Erythrosin B的壽命為88ps，與文獻(xiàn)報(bào)道值幾乎一致【1,2】。以下熒光標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的壽命測(cè)試對(duì)照表【1】，出自于由九個(gè)科研團(tuán)隊(duì)共同參與的一個(gè)國(guó)際合作項(xiàng)目，從表中可以看到，赤蘚紅B在水溶液中的壽命參考值為89±3ps。
熒光標(biāo)準(zhǔn)物的壽命測(cè)試對(duì)照表
TCSPC Plus熒光壽命升級(jí)包推薦
技術(shù)參數(shù) | ||
DCS900PC-G2 | 時(shí)間通道數(shù) | 65535 |
時(shí)間分辨率 | 2/4/.…/33554432 ps | |
死時(shí)間 | 2ns | |
計(jì)時(shí)抖動(dòng) | ＜10ps | |
R928P PMT | 光譜范圍 | 185-900nm |
上升時(shí)間 | ≦2.2ns | |
暗計(jì)數(shù) | ≦100CPS@-10℃ | |
以舊換新， 定制靈活
對(duì)于已有卓立漢光熒光壽命測(cè)試系統(tǒng)，并且有升級(jí)需求的用戶(hù)，我們也提供了靈活定制化的“以舊換新"方案，詳情歡迎垂詢(xún)。
參考文獻(xiàn)
【1】 Fluorescence Lifetime Standards for Time and Frequency Domain Fluorescence Spectroscopy. Anal. Chem. 2007, 79, 2137-2149
【2】 Measuring and Sorting Cell Populations Expressing Isospectral Fluorescent Proteins with Different Fluorescence Lifetimes. PLoS ONE 9(10): e109940.
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